小鼠胚胎成纤维细胞
小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse Embryonic Fibroblasts (MEF)）是一种自小鼠胚胎中分离而来的成纤维细胞。在体外培养时，MEF细胞和其他类型的成纤维细胞相同，呈现细长的梭形。MEF细胞属于有限细胞系，在多次传代后会衰老，增殖生长能力下降，最后逐渐死亡。如果想要使MEF细胞能无限生长分裂，则需要使用一些手段对其进行永生化。目前较为常用的手段有病毒或病毒因子（如SV40大T抗原）转化、多次传代等。经过永生化的MEF细胞可以无限增殖分裂，但性状也会发生一些改变[1][2]。
MEF细胞在生命科学研究，尤其是干细胞研究中扮演着重要角色。实验室中常用的细胞系之一NIH 3T3即为永生化的MEF细胞[3]。
制备与培养 编辑
制备MEF细胞，需要怀孕的小鼠。将怀孕小鼠麻醉后断颈处死后，在生物安全柜中使用无菌操作剖开其腹部，将小鼠胚胎取出，并将之与胎盘剥离。小鼠胚胎去掉头、肝后消毒，然后使用酶进行消化，得悬浮的单个细胞。将这些细胞种入组织培养皿中进行培养，即得原代培养的MEF细胞。体外培养的MEF细胞使用加有10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基培养即可。可以根据需要，加入1%青霉素-链霉素以减少细菌污染风险。MEF传代时，使用胰酶消化细胞，再以1:5的比例将细胞转入新的培养皿中[4][1]。
应用 编辑
1963年，两名纽约大学医学部的研究人员，即乔治·托达洛（George Todaro）和哈沃德·格林（Howard Green）通过反复传代取得了永生化的MEF细胞。这些细胞经过鉴定、发展，成为了今日生物实验室常用的NIH 3T3细胞系 [3]。
经过丝裂霉素或伽玛射线处理的MEF细胞不再具有分裂能力，可在胚胎干细胞培养中用作滋养层，分泌信号分子，创建类似于胚胎的微环境，利于胚胎干细胞在体外生长[5]。2006年，山中伸弥通过转入四个山中因子（Klf4、Oct4、Sox2、c-Myc）,将MEF细胞重变成为了与胚胎干细胞相似的iPS细胞，成功使动物终末分化的细胞脱分化，对干细胞生物学的基础研究和应用研究都具有重要意义[6]。
参见 编辑
参考 编辑
- ^ 1.0 1.1 Jian-ming Xu. Preparation, Culture, and Immortalization of Mouse Embryonic Fibroblasts. Current Protocols in Molecular Biology (2005) 28.1.1-28.1.8.
- ^ Melissa M. St. Amand; John A. Hanover2; Joseph Shiloach1. A comparison of strategies for immortalizing mouse embryonic fibroblasts. J Biol Methods 2016;3(2):e41.
- ^ 3.0 3.1 TODARO GJ, GREEN H. Quantitative studies of the growth of mouse embryo cells in culture and their development into established lines.. J Cell Biol. 1963 May; 17():299-313.
- ^ LANCTÔT. PREPARATION AND FREEZING OF MOUSE EMBRYONIC FIBROBLASTS (PDF). LANCTÔT lab, MIT.[永久失效链接]
- ^ Tarik Regad; et al. Principles of Stem Cell Biology and Cancer. Wiley Blackwell. 2015: 3–5. ISBN 978-1-118-67062-0.
- ^ Kazutoshi Takahashi, Shinya Yamanaka. Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors. Cell. 2006-08-25, 126 (4): 663–676. doi:10.1016/j.cell.2006.07.024.