热启动聚合酶链式反应
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热启动聚合酶链式反应(英语:Hot start PCR)是一种改良的聚合酶链式反应方法,主要用来避免操作过程中产生非特异性序列的扩增。将DNA聚合酶与其他反应物隔绝,或是使用在高热状况下才会激活的聚合酶,避免在未达到设定温度前就开始反应。
热启动PCR有几种方式:
- 蜡隔绝法:将除了聚合酶以外的反应物加入PCR管后,加滴熔融的石蜡;待石蜡凝固后再加入聚合酶。放入PCR仪开始反应升温后,石蜡融化浮至最顶层,聚合酶才与其他反应物混合。石蜡可同时作为防止蒸发用。
- 热启动聚合酶(化学型):经过化学分子修饰的聚合酶,高热下结构改变而启动。
- 热启动聚合酶(抗体):带有针对聚合酶的免疫抗体,高热下使抗体分离而启动。
- 热启动聚合酶(共价键结):改良自抗体型,使用小分子的化合物,阻塞聚合酶作用位置,高温下分离。
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