布拉德福蛋白质定量法

布拉德福蛋白质定量法（Bradford protein assay），亦称作“考马斯亮蓝法”、“考马斯蓝染色法”（coomassie blue staining），为一种利用光谱学技术分析溶液中蛋白质浓度的技术。本定量法会受待测氨基酸序列影响，此方法为Marion M. Bradford医生所开发。

原理

左：布拉德福溶液
右：布拉德福溶液+溶菌酶。

布拉德福蛋白质定量法为一种利用比色法测定蛋白质浓度的化验法。考马斯亮蓝G-250在酸性环境下，会从红色型态转为蓝色型态，并与蛋白质紧密结合。在形成这个复合物的过程中会经历两种反应：红色态的考马斯亮蓝会先将其自由电子丢给蛋白质的可电离区，造成蛋白质构型改变，并暴露其疏水性区段。于是蛋白质的三级结构会以凡得瓦力与染剂结合。此外，染剂中的负电区会与蛋白质中的正电区相互结合，与蛋白质结合的考马斯亮蓝会因此稳定其蓝色构型，造成溶液颜色改变，此时即可利用光谱仪来测量此变化。

与蛋白结合之后的染料，在一段时间（2 分钟到 1 小时）之内，其吸收光谱图在 595 nm 处有一个最大吸收峰。 染料在与蛋白结合前，以阳离子形态存在，显红色或者绿色；与蛋白结合之后，染料分子的阴离子形态被稳定，显蓝色。染料的吸收光谱在 595 nm 处的吸收峰的增加，正比于结合了蛋白质的染料分子数目，故也正比于样品中蛋白质的数目（浓度）。

布拉德福蛋白质定量法与其它测量蛋白的方法不同，不容易受到蛋白质中其它化学成分的影响。

缺点

此蛋白质分析法会受几种洗涤剂和中性盐的干扰，如SDS，Triton。 结果也取决于所分析蛋白质中氨基酸的种类。

实验方法

实验器材

• 0.15 M 氯化钠
• 微量吸管

实验步骤（标准分析，浓度：200-1500 µg/mL）

1. 准备一纯蛋白质（通常以牛血清蛋白）溶于0.15 M 氯化钠溶液中，稀释浓度为250、500、750和1500 µg/mL。并同时以同浓度稀释待测蛋白质。
2. 在每个试管加入 100 µL 的稀释蛋白质
3. 加入 5.0 mL 的考马斯亮蓝G-250到各试管并混合均匀。
4. 将光谱仪波长调整至 595 nm，并以无蛋白质的一管作为基准。
5. 5分钟后测量各试管在 595 nm 下的吸光值
6. 画出标准曲线，计算其吸光系数，并推估蛋白浓度

替代化验法

其他替代蛋白质化验法还有：

• 紫外－可见分光光度法
• 双缩脲试剂
• Lowry protein assay
• BCA protein assay
• Amido black protein assay

参考文献

• Zor, T.; Selinger, Z., Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies, Anal. Biochem., 1996, 236: 302–308, PMID 8660509, doi:10.1006/abio.1996.0171 
• Noble, J.E.; Bailey, M.J.A., Quantitation of Protein, Methods Enzymol., 2009, 463: 73–95, doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1 
• Albright, Brian, Mathematical Modeling with Excel: 60, 2009, ISBN 978-0763765668 
• Stephenson, Frank Harold, Calculations for molecular biology and biotechnology: a guide to mathematics in the laboratory: 252, 2003, ISBN 0126657513 
• Dennison, Clive, A guide to protein isolation, Focus on structural biology, 2003, 3: 39, ISBN 1402012241 
• Ibanez, Jorge G., Environmental chemistry: fundamentals: 60, 2007, ISBN 0387260617 

外部链接

• Bradford assay chemistry （页面存档备份，存于互联网档案馆）
• Variable Pathlength Spectroscopy （页面存档备份，存于互联网档案馆）
• OpenWetWare （页面存档备份，存于互联网档案馆）