深宵巴士路線,是指在由晚間行駛的巴士路線,特別是深宵服務。
與日間路線相對,深宵巴士的價錢比日間的巴士路線昂貴一點。不少大城市都有深宵巴士路線,服務夜間出門人士。深宵巴士大多只在最終一班巴士或鐵路列車開出前後,開出1班至2班班次,甚少終夜運行。只有很少地方例如香港,才有大部份深宵巴士終夜運行。
深宵巴士除了在市內行走,亦有長途行走的深宵巴士。長途行走的深宵巴士,通常晚上出發,翌朝到達,為乘客節省一晚住宿費用。