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Vero细胞

細胞系
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Vero细胞亦称绿猴肾细胞[1]，是一种非整倍性的非洲绿猴（属名：Chlorocebus）肾细胞系，最初由日本千叶大学的安村美博于1962年3月27日，分离自正常成年非洲绿猴的肾脏上皮细胞[2]。“vero”即“verda reno”的缩写，其中“verda reno”在世界语中有“绿色的肾脏”的意思，而“vero”则在世界语中表示“真相”[3] 。

在绿灯下放大了100倍的Vero细胞

特征 编辑

Vero细胞是连续的非整倍性细胞系，这意味着它的染色体数目异常，而且已知连续的细胞系可以通过许多分裂周期，不会老化，Vero细胞的干扰素分泌出现缺陷。它们与正常的哺乳动物细胞不同，在被病毒感染时不会分泌干扰素α/β[4]。然而，它们仍然具有干扰素-α/β受体（英语：Interferon-alpha/beta receptor）（IFNAR），因此当将重组干扰素添加到其培养基中时，它们仍然可以作出反应。

Sun等合成了五种不同尺寸的草酸钙（COM）晶体，包括50 nm、200 nm、1 μm、3 μm、10 μm，并且比较这五种尺寸的草酸钙晶体对Vero细胞的损伤差异[5][6]。实验结果表明，COM的尺寸和聚集程度是影响晶体细胞毒性的重要原因，而细胞对晶体的内吞方式与晶体尺寸存在密切的关系[5]。Vero细胞内吞50nm和100 nm的COM晶体主要以网格蛋白介导的途径，内吞1 μm的COM晶体则主要以巨胞饮（macropinocytosis）的形式进行内吞作用，而Vero细胞难以内吞尺寸更大的微米晶体[7]。

2014年，有日本的研究人员确定Vero细胞的整个基因组序列[8]。Vero细胞的12号染色体具有纯合的〜9-Mb缺失，导致基因组中I型干扰素基因簇和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂CDKN2A（英语：CDKN2A）和CDKN2B（英语：CDKN2B）的丢失[8]。尽管非洲绿猴先前被归类为草原猴（Cercopithecus aethiops），但是它们已经被归类为绿猴属（Chlorocebus）[9]。有基因组分析表明，Vero细胞源自雌性绿猴（Chlorocebus sabaeus）[8]。

细胞培养 编辑

Vero细胞在传代培养时的生长状况良好，并且发现细胞膜界线清晰和胞浆透明度较好的现象。Vero细胞的形态较为完整，细胞增殖的速度较快。Vero细胞传代后的第三天开始形成单层，传代细胞在第七天形成致密单层，此种致密单层在连续培养第十二天后逐渐老化，细胞在第十六天开始从培养瓶壁上脱落[10]。

Vero细胞在转瓶后，可以在细胞培养二十四小时后出现贴壁，细胞在培养三天后可以达到相对静止期，细胞培养的第五天可以长成单层，细胞培养到第十二天时发现其生长致密，而细胞培养至第十四天时则开始出现老化。转瓶后的细胞生长速度比转瓶前缓慢，然而单层细胞持续的时间比转瓶前更持久。进行支原体检查时未发现有支原体的生长及污染。细胞型分析结果表明Vero 细胞的核型没有发现明显的异常之处，而染色体数目也没有明显变化[10]。

研究用途 编辑

Vero细胞可以用于多种研究用途。Vero细胞在建立后不久，就被发现对多种类型的病毒高度敏感，其中包括猿猴空泡病毒40[11]、麻疹病毒[12]、风疹病毒（英语：Rubella virus）[13]、节足动物携带性病毒（英语：Arbovirus）[14]及腺病毒[15]等。后来被发现也容易感染细菌毒素，包括白喉毒素（英语：Diphtheria toxin）[16]、不耐热肠毒素（heat-labile enterotoxins）[17]和志贺氏样毒素[18][19]等。

Vero细胞可以筛选大肠埃希氏菌的毒素。在Vero细胞被建立后，这些毒素亦可以称为“Vero毒素”。由于与痢疾志贺氏菌（英语：Shigella dysenteriae）（Shigella dysenteriae）分离出的志贺氏毒素（英语：Shiga toxin）相似，因此后来被称为志贺氏样毒素（Shiga-like toxin）[8]。

Vero细胞又可以作为锥虫目（英语：Trypanosomatida）等真核寄生虫的宿主细胞[8]。此外，Vero细胞被广泛应用于病毒感染分子机制研究、疫苗及重组蛋白的生产[20][21][22]，世界卫生组织甚至认可其作为疫苗生产细胞系，建议将其作为流感疫苗生产的替代基质。目前已知Vero细胞可以协助生产狂犬病[23]及水貂犬瘟热等疫苗[24]，而用Vero细胞培养的流感疫苗可以更好地介导人体产生对流感的免疫应答[25]。

猪流行性腹泻病毒 编辑

Hofmann等通过在培养基中添加胰蛋白酶，证实猪流行性腹泻病毒（PEDV）除了能够在天然宿主的初始靶细胞（英语：Codocyte）上增殖外，还可以在Vero细胞中增殖。同时又发现胰蛋白酶对PEDV纤突糖蛋白的切割作用，增强病毒对Vero细胞的感染力[26]。Ye等通过构建稳定表达PEDV ORF3蛋白的Vero细胞，发现ORF3蛋白能够促进PEDV的增殖[27]。然而有研究显示不同的结果，例如Chen等发现orf3基因转译的提前终止，有利于PEDV适应Vero细胞，并且可以提高其在Vero细胞上的复制能力[28]；而Sun等对非胰蛋白酶依赖PEDV 85-7的Vero细胞的研究表明，PEDV的复制并没有被orf3基因的突变或转译的提前终止显著影响[29]。另外，Li等构建缺失orf3基因的重组PEDV，发现orf3基因缺失株和携有全长orf3基因的重组病毒，在Vero细胞上的滴度相同，故而推测orf3基因不影响其在Vero细胞上的增殖[30]。

参考文献 编辑

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